• 1. Extraction saline d’ADN
  • 2. Séparation lymphocytes
  • 3. Lignées lymphoblastoïdes - Immortalisation
1. Transférer le sang dans un tube de 50 ml puis ajouter 35ml de solution de lyse BLB 1x - Homogénéiser.
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2. Placer le tube dans la glace pendant 30 minutes au minimum.
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3. Centrifuger 10 min à 2500 tours/minute à 4°C.
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4. Eliminer le surnageant (le surnageant est récupéré selon les lois en vigueur concernant le traitement des déchets dérivés de produits sanguins).
5. Ajouter 35 ml de solution de lyse BLB 1x. Vortexer puis placer le tube dans la glace 30 min – Répéter les étapes 3, 4, 5, 3 et 4 puis passer à l'étape 6.
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6. Après la 3ème centrifugation, éliminer le surnageant. Ajouter 3 ml de solution de lyse des globules blancs WLB.
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7. Ajouter 150µL de SDS 20% et 100µl de protéinase K (20 mg/ml)- vortexer pour homogénéiser.
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8. Placer les tubes au bain marie à 37°C sous faible agitation toute la nuit.
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9. Ajouter 1 ml de NaCI 6M Homogénéiser jusqu’à ce que la solution devienne laiteuse.
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10. Centrifuger 20 min à 3600 tours / min à 20°C sans frein.
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